TECNICAS DE TINCION

Las bacterias no teñidas muestran pocos detalles morfológicos; el diagnóstico bacteriológico generalmente se basa en las diferentes afinidades tintoriales de las bacterias por lo que para poder observar a los microorganismos es necesario teñir la célula el cual resulta de un conjunto de reacciones fisicoquímicos muy complejos, algunas reacciones pueden ser irreversibles y otras no, por ejemplo algunos colorantes que han teñido en exceso pueden eliminarse con disolventes adecuados.

La mayoría de los colorantes utilizados en microbiología son derivados de la anilina, los colorantesestán formados por uno o más anillos bencénicos conectados por uniones químicas bien definidas (cromóforos) que están bien asociados con la producción de color, teóricamente ciertos radicales químicos poseen la propiedad de absorber la luz de diferentes longitudes de onda, además poseen un grupo funcional llamado auxocromo que permite su unión a componentes con carga contraria presentes en la célula.
Los colorantes se designan como ácidos o básicos, termino que no indican necesariamente sus reacciones de pH en solución, sino más bien si una parte significativa de la molécula es aniónica o catiónica. Desde el punto de vista práctico, los colorantes básicos tienen estructuras de naturaleza ácida. En general, el proceso seguido en todas las tinciones conlleva las siguientes etapas: extensión,
fijación, tratamiento con colorantes y observación.

Extensión: Se realiza sobre un portaobjetos que ha de estar totalmente limpio. Si la muestra es
líquida se hace directamente y, si es sólida, hay que resuspenderla previamente en una gota de
H2O.
Fijación: Tiene por objeto adherir la muestra al portaobjetos y desnaturalizar las proteínas para
facilitar la acción del colorante. Normalmente se realiza con calor, pasando la muestra
repetidamente a 10 cm de la llama del mechero.
Tinción: Se realiza añadiendo los colorantes sobre los microorganismos sometidos a los
procesos anteriores.
Puede ser de varios tipos:
TINCIÓN NEGATIVA: 
Los colorantes no tiñen el microorganismo, sino el entorno, aumentando de este modo su
contraste. La muestra se extiende sobre una gota del colorante (nigrosina).
TINCIÓN SIMPLE: 
Se utiliza un solo colorante que puede ser de cualquier tipo. Al igual que la tinción negativa, sólo
nos permite observar la forma, el tamaño y el tipo de agrupación de las células.
TINCIÓN DIFERENCIAL: Tinción de Gram 
La pared celular es responsable de la tinción de Gram, el procedimiento de la tinción se inicia con una tinción de
las células bacterianas fijadas mediante el colorante básico cristal violeta, posteriormente se trata con una
disolución de yodo, el yodo forma un complejo con el cristal violeta que es insoluble en agua y sólo medianamente
soluble en alcohol o acetona. Las células se tratan después con alcohol para diferenciarlas, las células Gram
positivas retienen el complejo colorante-yodo por lo que las observamos de color morado-azules y las células Gram
negativas son decoloradas por el alcohol por lo que se hacen visibles mediante la coloración de contraste que en
este caso es la fucsina.