¿Como se cuentan los mesofilos en los alimentos?

El recuento de microorganismos mesófilos aeróbicos, conocido también como recuento de placas aeróbicas (APC), es el método más usual para la estimación del número de microorganismos viables en alimentos, aunque frecuentemente es usado mal. El APC no mide el total de la población de bacterias en una muestra de comida, sino la fracción de la flora microbiana que es capaz de producir colonias en el medio de cultivo bajo las condiciones predominantes en la incubación de la placa. Este trabajo hace un análisis de los microorganismos mesófilos aeróbicos, su significado y como interpretar su presencia en los alimentos..

Aspectos generales sobre Recuento microorganismos aerobios mesófilos 
Los resultados de este análisis permiten:

	Verificar efectividad de los procedimientos de limpieza y desinfección.
	Determinar si las temperaturas aplicadas en los procesos fueron las adecuadas.
	Determinar el origen de la contaminación durante los procesos de elaboración de los alimentos.
	Verificar condiciones óptimas de almacenamiento y transporte.
	Obtener información acerca de la vida útil de los alimentos.
	Indicar alteración incipiente en ciertos alimentos

¿Qué tipo de bacteria crece principalmente en los alimentos?

Coliformes.
La denominación de Coliformes se le otorga a todo aquel grupo de bacterias que tienen ciertas características bioquímicas en común y son de mucha importancia como indicadores de contaminación del agua y de los alimentos. El termino Coliformes proviene de Coli de la bacteria principal de este grupo, el cual es la Escherichia Coli. Como ya se sabe la bacteria E. Coli es de origen fecal; para distinguir a las demás que no son de origen fecal se utiliza el termino de Coliformes Totales y a los de origen intestinal o fecal Coliformes Fecales. Estos términos ayudan mucho para la diferenciación, ya que otorga más veracidad y un alto grado de certeza si la contaminación que presenta el agua es de origen fecal.
Las investigaciones ecológicas han demostrado que E. Coli proviene del tracto intestinal del hombre y de los animales de sangre caliente, si puede sobre vivir e incluso multiplicarse en otros nichos apropiados. Por lo tanto, la presencia de esta bacteria indica que puede haber existido contaminación fecal y que el consumidor podría expuesto a patógenos entéricos cuando ingiere el alimento. Para la evaluación higiénica de alimentos crudos o de productos que no habían sido sometidos al tratamiento de inocuidad completo mediante calor, E. Coli es el microorganismo índice mas valido.
Se utiliza a veces también la denominación coliformes fecales refiriéndose a los microorganismos que crecen y producen gas a partir de la lactosa en un medio que contiene sales biliares u otros agentes selectivos equivalentes y que se incuba a 44-45°C. Los coliformes son bacilos cortos que se han definido como bacterias aerobias o anaerobias facultativas que fermentan la lactosa con producción de gas. Las principales especies de bacterias coliformes son el E. Coli y Enterobacter Aerogenes; no obstante, las especies que es posible que se ajusten a estos criterios, son mas de veinte, encontrados entre las mismas especies de otros géneros de la familia Enterobacteriaceae e incluso especies de Aeronomos. El grupo de coliformes fecales incluye a los coliformes capaces de crecer a temperatura elevada. 
La especie E. Coli es considerada generalmente como integrante de la flora normal del tracto intestinal del hombre y de los animales. La temperatura óptima de crecimiento del microorganismo es de 37°C, con un intervalo de crecimiento de 10 a 40°C. Su pH optimo de crecimiento es de7.0 a 7.5 con un pH mínimo de crecimiento de valor de 4.0 y un pH máximo de crecimiento de valor de 8.5. Este microorganismo es relativamente termosensible y puede ser destruido con facilidad a temperaturas de pasteurización y también mediante la apropiada cocción de los alimentos.
Es quizás el organismo procarionte más estudiado por el ser humano, se trata de una bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales —incluido el humano— y por ende en las aguas negras. Fue descrita por primera vez en 1885 por Theodore von Escherich, bacteriólogo alemán, quién la denominó Bacterium coli. Posteriormente la taxonomía le adjudicó el nombre de Escherichia coli, en honor a su descubridor. Ésta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo. Además produce vitaminas B y K. Es un bacilo que reacciona negativamente a la tinción de Gram, es anaerobio facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--. Es una bacteria utilizada frecuentemente en experimentos de genética y biotecnología molecular. 

NUMERO MAS PROBABLE

El método del Número más probable (NMP) (Most probable number - MPN - en inglés), también conocido como el método de los ceros de Poisson, es una forma de obtener datos cuantitativos en concentraciones de elementos discretos a partir de datos de incidencia positiva/negativa. 

Es una estrategia eficiente para estimar densidades de población que se emplea cuando una evaluación cuantitativa de elementos individuales no es factible.El método se basa en determinar la presencia o ausencia (positivo o negativo) de atributos específicos de microorganismos en copias obtenidas por diluciones consecutivas a partir de muestras de suelo u otros ambientes. Se basa en el principio de que una única célula viva puede desarrollarse y producir un cultivo turbio.

El método requiere la realización de una serie de diluciones en serie de la muestra de cultivo, en un medio líquido adecuado para el crecimiento de dicho organismo de un volumen diez veces mayor. Luego, se incuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que recibieron una o más células microbianas procedentes de la muestra, se pondrán turbios, mientras que los tubos que no recibieron ninguna célula permanecerán transparentes. 

Algunas de las ventajas del NMP son:  La capacidad de estimar tamaños poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso (selectividad); por ejemplo se puede determinarla densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en una muestra de suelo usando el método de infección de plantas.  Provee una recuperación uniforme de las poblaciones microbianas de suelos diversificados.  Determina sólo organismos vivos y activos metabólicamente. 

 Suele ser más rápido e igual de confiable que los métodos tradicionales de esparcimiento en platos de cultivo, entre otros.Se utiliza para contar microorganismos que son difíciles de cultivar en medio sólido. También se usa para determinar el número de células de un cultivo mixto que pueden crecer en un medio líquido determinado. Por ejemplo, puede emplearse para determinar la contaminación del agua potable, determinando el número de bacterias que pueden crecer en un medio que contiene lactosa. Estas bacterias probablemente sean Escherichia Coli provenientes de aguas residuales contaminadas, y la presencia de E. Coli en el agua potable es una prueba presuntiva de contaminación.

Práctica 4. Dilución bacteriana

CRECIMIENTO EN TUBO

La morfología de las colonias es una de las características básicas de las bacterias y es indispensable para identificación preliminar.
El tamaño de las bacterias (colonias) asumiendo condiciones de cultivo favorables bastante uniforme de toda una especie.

INOCULACION DE MEDIOS SEMISOLIDOS
El contenido del tubo inclinado constituye un medio adecuado para el desarrollo de bacterias, especialmente aerobias y anaerobias facultativas.

INOCULACION DE MEDIOS LÍQUIDOS
El crecimiento bacteriano en medios líquidos se observa de la siguiente manera:

1. Enturbiamiento
2. Formación de velo, pequeña masa de células que flotan en la parte superior del cultivo
3. Sedimiento, deposito de células que permanecen en la parte inferior del tubo

INOCULACION EN MEDIOS SÓLIDOS
Primero se atraviesa todo el fondo del agar con el asa recta de inoculación, posteriormente este se retira con un movimiento en "S" a través del agar que disemina el inoculo. Se utiliza el asa recta.

Epidemias causadas por contaminación bacteriológica

LECTURA DE BIOQUIMICAS

A/A	ÁCIDO/BASE	(-) NEGATIVO	Prueja rojo metidlo en VP -      Agregar 3 gotas RM  en VP.
K/A	BASE /ÁCIDO	(+) POSTIVIO +++ MUY POSITIVO	ANILLO ROJO (+)
K/K	BASE/BASE	V – VARIABLE	NO ANILLO ROJO (-)

CURVA DE CRECIMIENTO BACTERIANO

El crecimiento bacteriano es la división de una bacteria en dos células hijas en un proceso llamado fisión binaria, previniendo que no se produzca ningún caso de mutación las células hijas resultantes serán geneticamente idénticas a la célula original.

Esta consiste de 4 fases que son las sig:

     Fase lag o de retraso

Durante esta fase, las bacterias se adaptan a las condiciones de crecimiento. Es el período en el que las bacterias individuales están madurando y no tienen aún la posibilidad de dividirse. Durante la fase de adaptación del ciclo de crecimiento de las bacterias, se produce la síntesis de ARN, enzimas y otras moléculas. Así que en esta fase los microorganismos no están latentes.

     Fase exponencial

Es un período caracterizado por la duplicación celular. El número de nuevas bacterias que aparecen por unidad de tiempo es proporcional a la población actual. Si el crecimiento no se limita, la duplicación continuará a un ritmo constante, por lo tanto el número de células de la población se duplica con cada período de tiempo consecutivo. Para este tipo de crecimiento exponencial, la representación gráfica del logaritmo del número de células frente al tiempo genera una línea recta. El crecimiento exponencial no puede continuar indefinidamente, sin embargo, porque el medio llega pronto al agotamiento de nutrientes mientras se acumulan los desechos.

     Fase estacionaria

Durante esta fase la tasa de crecimiento disminuye como consecuencia del agotamiento de nutrientes y la acumulación de productos tóxicos. Esta fase se alcanza cuando las bacterias empiezan a agotar los recursos que están disponibles para ellas. Esta fase se caracteriza por un valor constante del número de bacterias a medida que la tasa de crecimiento de las bacterias se iguala con la tasa de muerte bacteriana.

     Fase declive o muerte

Las bacterias se quedan sin nutrientes y mueren. Esta modelo de crecimiento del cultivo básico en lotes se mantiene y pone su énfasis en los aspectos de la proliferación de bacterias que pueden diferir de las del crecimiento de la macrofauna. Se hace hincapié en clonalidad, división asexual binaria, el breve tiempo de desarrollo en relación con la replicación en sí, la tasa de mortalidad aparentemente baja, la necesidad de pasar de un estado inactivo a un estado reproductivo y, por último, la tendencia de cepas adaptadas de laboratorio para agotar sus nutrientes.

Pruebas bioquimicas

PRUEBAS BIOQUIMICAS

Las pruebas bioquímicas son un conjunto de reacciones que derminan la actividad de una vía metabólica de la bacteria a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer se transforma o no. Para ello, hay que partir de un cultivo puro obtenido en el aislamiento, subcultivando de una colonia bien aislada.

Es aconsejable realizar una comprobación efectuando una siembra en placa en la que crezcan únicamente colonias del  mismo tipo.

De igual manera las pruebas bioquímicas son una serie de análisis clínicos que sirven a la medicina como apoyo a la hora de diagnosticar infecciones por bacterias.

IMVIC

El IMVIC se compone de cuatro pruebas: Indol,rojo de metilo,  voges proskaver y citrato. Su finalidad es identificar un organismo del grupo de los coliformes.

La presencia de estos es que indica la contaminación  fecal.

v  Indol: Estudia la capacidad de degradar el triptófano con producción de Indol y metabolitos indolicos.

v  Rojo de metilo: Estudia la fermentación acido mixta con producción de ácidos estables en el tiempo.

v  Voges proskaver: Estudia la fermentación butanodiólica con formación de un metabolito intermediario neutro.

v  Citrato: Estudia la capacidad de utilizar el citrato como una fuente de carbono.

ENZIMÁTICAS

v  Oxidasa: Estudia la presencia del enzima citocromo C oxidasa que actúa en la cadena respiratoria del organismo.

v  Catalasa: Estudia si el microorganismo posee el enzima catalasa que actúa descomponiendo el peróxido del hidrogeno.

v  Coagulosa: Estudia la producción de enzimas capaces de coagular plasma.

v  Ureasa: Estudia si el microorganismo cataliza hidrolisis de la urea.

Práctica 3. Pruebas bioquímicas.

RESPIRACION BACTERIANA

En las Bacterias la respiración puede ser de tipo: 
- Aerobia 
- Anaerobia Facultativa 
- Anaerobia obligada. 
En las bacterias Aerobias la respiración celular se realiza en la Cadena oxidativa o respiratoria asociada con la membrana plasmática que en ciertos casos se invagina formando una estructura llamada Mesosoma. A nivel de los Oxisomas localizados en el Mesosoma ya que carecen de mitocondrias los nutrientes son oxidados aeróbicamente liberando energía química y CO2. 
En las Bacterias Anaerobias Facultativas ( pueden o no fijar el O2 atmosférico) al respiración con O2 se realiza en los Oxisomas que forman las unidades fundamentales de la cadena oxidativa, utilizan la Glucólisis y luego la oxidación aerobia del ácido pirúvico en ATP y CO2, en tanto que aquellas bacterias que no fijan el O2 atmosférico la respiración es de tipo Anaerobia ( Fermentación) oxidando la Glucosa en condiciones anaerobias. 
En las bacterias Anaerobias obligadas no poseen mecanismos para fijar el O2 atmosférico, por lo tanto la respiración en ellas es Anaerobia ( Fermentación). 
Oxidan biológicamente la Glucosa por Glucólisis y luego trasnforman anaeróbicamente por Fermentación el ácido pirúvico en Etanal y posteriormente en Etanol ( fermentación alcohólica). 

MICROSCOPIO

El microscopio es un instrumento óptico que amplifica la imagen de un objeto pequeño. Es el instrumento que más se usa en los laboratorios que estudian los microorganismos. Mediante un sistema de lentes y fuentes de iluminación se puede hacer visible un objeto microscópico. Los microscopios pueden aumentar de 100 a cientos de miles de veces el tamaño original. Los diversos elementos que existen en la naturaleza, presentan tamaños, formas y composiciones distintas, la mayoría de ellas pueden verse, algunas a simple vista, y otras mediante 
instrumentos. 

Un microscopio óptico 
Es un instrumento (de un lente o varios lentes), que amplifica una imagen y permite la
observación de mayores detalles de los posibles a simple vista. El microscopio más simple es
una lente de aumento o un par de anteojos. El poder de resolución del ojo humano es de 0,2
mm es decir que para ver dos objetos separados estos deben estar como mínimo a esa
distancia. El microscopio aumenta la imagen hasta el nivel de la retina, para captar la
información. La resolución depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el espesor del
espécimen, la calidad de la fijación y la intensidad de la coloración. Teóricamente la máxima
resolución que se puede alcanzar es de 0,2 µm dada por una luz con longitud de onda de 540
nm, la cual pasa por un filtro verde (muy sensible por el ojo humano) y con objetos
condensadores adecuados. El ocular aumenta la imagen producida por el objetivo, pero no
puede aumentar la resolución. Existen distintos microscopios ópticos generales y de
investigación que se diferencian en factores tales como la longitud de onda de la iluminación del
espécimen, la alteración física de la luz que incide en la muestra y procesos analíticos que se
aplican a la imagen final.
El microscopio compuesto esta formado por tres sistemas: 1. Sistema de iluminación; 2. Sistema óptico y 3..Sistema mecánico.
El sistema de iluminación corresponde a la fuente de luz y sus aditamentos para iluminar eficazmente la preparación y esta formado principalmente por la lámpara (6V), el diafragma de campo y el condensador (lente frontal, diafragma de iris y lente auxiliar)
El sistema óptico esta formado por una serie de lentes de vidrio en los objetivos y oculares que permiten agrandar la imagen y esta formado por los objetivos, tubo y el ocular.
El sistema mecánico esta formado por una serie de engranes y botones que permiten realizar el movimiento y cambio de las lentes así como el enfoque de la preparación y esta formado por la base, estativo, tornillos macrométrico y micrométrico, platina, revolver y portarevolver.

TECNICAS DE TINCION

Las bacterias no teñidas muestran pocos detalles morfológicos; el diagnóstico bacteriológico generalmente se basa en las diferentes afinidades tintoriales de las bacterias por lo que para poder observar a los microorganismos es necesario teñir la célula el cual resulta de un conjunto de reacciones fisicoquímicos muy complejos, algunas reacciones pueden ser irreversibles y otras no, por ejemplo algunos colorantes que han teñido en exceso pueden eliminarse con disolventes adecuados.

La mayoría de los colorantes utilizados en microbiología son derivados de la anilina, los colorantesestán formados por uno o más anillos bencénicos conectados por uniones químicas bien definidas (cromóforos) que están bien asociados con la producción de color, teóricamente ciertos radicales químicos poseen la propiedad de absorber la luz de diferentes longitudes de onda, además poseen un grupo funcional llamado auxocromo que permite su unión a componentes con carga contraria presentes en la célula.
Los colorantes se designan como ácidos o básicos, termino que no indican necesariamente sus reacciones de pH en solución, sino más bien si una parte significativa de la molécula es aniónica o catiónica. Desde el punto de vista práctico, los colorantes básicos tienen estructuras de naturaleza ácida. En general, el proceso seguido en todas las tinciones conlleva las siguientes etapas: extensión,
fijación, tratamiento con colorantes y observación.

Extensión: Se realiza sobre un portaobjetos que ha de estar totalmente limpio. Si la muestra es
líquida se hace directamente y, si es sólida, hay que resuspenderla previamente en una gota de
H2O.
Fijación: Tiene por objeto adherir la muestra al portaobjetos y desnaturalizar las proteínas para
facilitar la acción del colorante. Normalmente se realiza con calor, pasando la muestra
repetidamente a 10 cm de la llama del mechero.
Tinción: Se realiza añadiendo los colorantes sobre los microorganismos sometidos a los
procesos anteriores.
Puede ser de varios tipos:
TINCIÓN NEGATIVA: 
Los colorantes no tiñen el microorganismo, sino el entorno, aumentando de este modo su
contraste. La muestra se extiende sobre una gota del colorante (nigrosina).
TINCIÓN SIMPLE: 
Se utiliza un solo colorante que puede ser de cualquier tipo. Al igual que la tinción negativa, sólo
nos permite observar la forma, el tamaño y el tipo de agrupación de las células.
TINCIÓN DIFERENCIAL: Tinción de Gram 
La pared celular es responsable de la tinción de Gram, el procedimiento de la tinción se inicia con una tinción de
las células bacterianas fijadas mediante el colorante básico cristal violeta, posteriormente se trata con una
disolución de yodo, el yodo forma un complejo con el cristal violeta que es insoluble en agua y sólo medianamente
soluble en alcohol o acetona. Las células se tratan después con alcohol para diferenciarlas, las células Gram
positivas retienen el complejo colorante-yodo por lo que las observamos de color morado-azules y las células Gram
negativas son decoloradas por el alcohol por lo que se hacen visibles mediante la coloración de contraste que en
este caso es la fucsina.

METABOLISMO BACTERIANO

TODOS los seres vivos llevan a cabo el procesamiento de los nutrientes que los mantienen vivos. A este conjunto de procesos, se le conoce como metabolismo y consiste de un gran número de reacciones químicas destinadas a transformar las moléculas nutritivas en elementos que posteriormente serán utilizados para la síntesis de los componentes estructurales; como pueden ser las proteínas. Otra parte importante del metabolismo es la de transformar y conservar la energía que está contenida en una reacción química en algún proceso que requiera de energía, como puede ser el trabajo o el movimiento.

Es evidente que los nutrientes son transformados cuando entran en un organismo, ya que en ningún caso el alimento contiene todas las moléculas que una célula requiere. Esto se vio con claridad al observar el crecimiento normal de levaduras en un medio de cultivo que sólo contenía glucosa como única fuente de energía.  Hoy sabemos que las transformaciones que sufre la glucosa no ocurren en un solo paso, sino que, por el contrario, se forman varios productos intermedios que en muchas ocasiones no tienen una función específica a no ser la de formar parte de lo que se conoce como vía metabólica.

Las principales funciones del metabolismo son:

• * formar las subunidades que luego serán utilizadas en la síntesis de macromoléculas
• * Proporcionar la energía necesaria para todos aquellos procesos que la requieran como transporte activo, movilidad, biosíntesis, etc.

El maravilloso Microscopio

CLASES DE ASAS MICROBIOLOGICAS Y SU USO

ASAS PARA BACTERIOLOGIA

1.-Asa en argolla o anillo, no calibrada, generalmente de alambre de nichrome. Sirve para siembra por estrias e inoculaciones en general.

2.-Asa recta, en hilo. Sirve para transladar una sola colonia a medios de identificacion, o subcultivo.

3.- Asa de platino en anillo. Calibrada para tomar 0.001 ml, para urocultivo.

ASAS PARA MICOLOGIA Y MICOBACTERIAS

4.- Asa espatulada, para manipular colonias duras y tomar muestras.

5.- Asa de alambre grueso en "L" para purificar colonias de hongos y procedimientos especiales.

6.- Aguja de diseccion con punta aguda, para purificar colonias pequenas y distribuir las preparaciones de hongos en fresco.

Reporte de práctica 2. Utilización de medios de cultivo y tinción de Gram

Tipos de medios de cultivo.

Debemos saber diferenciar entre los medios de cultivo que existen

Atendiendo a su estado físico:

-Líquidos

-Semisólidos

-Sólidos

Atendiendo a su utilidad práctica:

Medios para aislamientos primarios:

-Para usos generales: No selectivos, para cultivo de una amplia variedad de organismos difíciles de hacer crecer. A menudo están enriquecidos con materiales como: sangre, suero, Hemoglobina, FX, FV, glutamina, u otros factores accesorios para el crecimiento de las bacterias.

♪ Agar Sangre, Schaeadler

-Selectivos: Se añaden sustancias que inhiban el crecimiento de ciertos grupos de bacterias, permitiendo a la vez el crecimiento de otras. Variando las sustancia añadidas, se varía el tipo y grado de selectividad.

♪ Mac Conkey, Kanamicina-Vancomicina

-Enriquecidos: Ralentizan/suprimen el crecimiento de la flora competitiva normal potenciando el cultivo y crecimiento deseado.

♪Selenito, medio con Vitamina K

-Para aislamientos especializados: formulaciones nutritivas especiales que satisfacen requerimientos de grupos específicos de bacterias, ayudando a su identificación.

♪Lowenstein

Medios para identificación:

-Diferenciales: Formulaciones especiales en las que se estudian las peculiaridades fisiológicas específicas de las bacterias. Seleccionando los medios adecuados se puede llegar a la identificación de casi cualquier bacteria

Condiciones que se requieren para un cultivo.

Debemos tomar en cuenta todas estas condiciones al momento de crear un cultivo si queremos que nuestras bacterias crezcan de una forma adecuada.

1. Disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancia inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar.

Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaban la pérdida de los factores nutritivos lábiles.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica.

Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.

2. Consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está ampliamente extendido en el laboratorio.

3. Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias, mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.

4. Condiciones adecuadas de humedad

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio.

5. Luz ambiental

La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos.

6. pH

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos normales.

7. Temperatura

Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofitos tienen rangos más amplios.

8. Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave.

Medios de cultivo

Bueno compañeros aquí hay un poco de información sobre los medios de cultivo.

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes.

El agar es un elemento solidificaste muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licua completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.

La Gelatina es otro agente solidificaste pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación.

En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.

También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias Gram-positivas).

NUTRICION BACTERIANA

La nutrición bacteriana de todos los organismos implica el aprovisionamiento de energia para llevar a cabo las reacciones metabolicas, y el suministro de materiales para la síntesis celular.

NUTRICION HETEROTROFA

En la nutrición heterótrofa, las reacciones catabólicas representan la forma de aprovisionamiento de energía para lo cual es necesario que exista alguna molecula donadora de electrones para los procesos de producción energetica, ya sea la fermentación o la respiración, esta ultima aerobia o anaerobia.

 En la nutrición autótrofa existe un paso previo, la fotosíntesis, durante el cual el organismo fábrica sus propias moleculas orgánicas a partir de sustancias inorgánicas sencillas.

Las bacteria se pueden dividir en:

Litrotofas: Son aquellas que solo requieren sustancia inorgánica sencilla.

Organotrofas: Requieren compuestos orgánicos.

Autótrofa: Crecen sintetizando su material a partir de sustancias inorgánicas sencillas.

Heterótrofas: Su fuente de carbono es órganica.

NUTRIMENTOS

Los alimentos bacterianos son considerados el material para que la celula obtenga energía, pueden abarcar compuestos desde proteinas hasta compuestos más complejos como el caucho.

NUTRIENTES UNIVERSALES
*Agua
*CO2
*Fosforo
*Sales minerales         

Datos curiosos sobre las bacterias.

Buenas noches compañeros, aqui les traigo algunos datos curiosos sobre las bacterias que tal vez no conozcan. espero y sea de su agrado la informacion:)

☺El cuerpo humano es el hogar perfecto para millones de bacterias beneficiosas.

☺Una boca contiene facilmente una 25 especies diferentes de bacterias, y mas de 500 de ellas han sido encontradas en la flora bucal.

☺¾ partes de las bacterias que viven en nuestro intestiso no han sido identificadas por los cientificos.

☺Los antibioticos pueden eliminar totalmente las bacteris benefisiosas de nuestro cuerpo, causandos consecuencias en la salud no deseadas.

☺100 000 bacterias por cm2 tienen el ser humano en la superficie de la piel.

☺Despues de salir un buen baño la poblacion bacteriana disminuye de 150 000 a 6 000.

☺25 000 por cm3 es la poblacion de  microbios que vive pegada al microfono del telefono.

☺En los excrementos se pueden identificar hasta 70 especies diferentes de microorganimos.

☺Aproximadamente 100 000 000 es el numero de bacterias que eliminamos atravez de las heces fecales cada dia.

☺1 000 000 000 de germenes se esconden en tu esponja del baño.

Tecnicas de vaciado

Tecnica de medios en matraz para vaciado en placa.

1.- esterilizas el medio de cultivo a las condiciones que indica el fabricante.

2.-una vez que el medio sale del autoclave, dejar enfriar a temperatura ambiente o en baño maria, a temperatura de 45+-2ºC

3.-preparar las placas en la mesa previamente etiquetadas con el inoculo proceder a vaciar el medio.

4.-despues de inoculr las diluciones de las muestras preparadas, agregar de 12 a 20ml del medio preparado, mezclar mediante 6 movimientos; 1: de derecha a izquierda. 2:en el sentido de las manecillas del rejol. 3:en el sentido del inoculo en el medio. cuidar que el medio no se move de la cubierta de las cajas y dejar solidificar.

Medios de cultivo en matraz para vaciado en placa de mohos y levaduras.

1.-se esteriliza a condiciones del fabricante

2.-dejar enfriar a temperatura ambiente y adiccionarle 1.04ml de acido tartarico al 10% por 100ml de medio.

3.-preparar las placas en la mesa previamente etiquetadas y ya con el inoculo, preceder a vaciar el medio.

Medios liquidos en el tubo.

1.-preparar el medio de cultivo (caldo) en un vaso precipitado y colocarlo en un dosificador regulado a 9ml y proceder a colocarlo en tubos de ensaye de 16x150mm con tapon de rosca previamente etiquetados y conteniendo una campana de Drham.

2.-procurar no cerrar los tubos de ensaye hasta el tope para evitar que estos exploten.

3.-colocar los tubos en un bote de lamina y colocarle papel Kraft a manera de gorro y proceder a esterilizar a condiciones que inda el fabricante.

4.-una vez esterilizados, dejarlos enfriar y colocarlos en un lugar fresco y seco o en el refrigerador para evitar la evaporacion.

*cuando se requiere tubos con otro tipo de caldo,se les coloca a cada uno de los tubos 3ml.

Tecnicas de estriado

Los pasos para llevar acabo la tecnica de aislamiento por estriado en placa son:

1.-Limpiar con alcohol la mesa de trabajo.

2.-Conectar 3 mecheros a las llaves del gas y prenderlos, regulizando en oxigeno.

3.-Esterilizar el asa hasta que obtenga un color rojo vivo, dejarlo enfriar en un extremo del agar.

4.-Tomar una gota de la muestra y comenzar el estriado. Evitar destapar completamente la tapa de los medios de cultivo para evitar contaminacion.

5.-Repetir el proceso segun la tecnica de estriado que se utilize, girando la caja y esterilizando el asa cada vez que se gire la casa, sin tomar muestra.

6.-Incubar durante 1 hora a 15 libras de presion.

Tipos de cultivo y sus funciones.

El material alimenticio es el medio de cultivo mientras que el crecimiento de los organismos es el cultivo.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artifical se debe de reunir una serie de condiciones como son:

 

                                ♦temperatura.

                                ♦Grado de humedad.

                                ♦Presion de oxigeno.

                                ♦Acidez correcta en alcanilidad.

asi como nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe de estar exento en todo microorganismo contaminante.

El agar es un elemento saldificado muy empleado para la preparacion de medios de cultivo, los medios que existen son:

♦Medios liquidos: llevan como nombre caldos nutritivos y se componen de carne, peptona y agua. se utilizan para cuando se usa la obtencion de una suspencion bacteriana de una concentracion.

♦Medios solidos: estos se preparan apartir de un medio liquido agregandosele un agente gelatificante. los mas utilizados son las gelatinas y el agar y todos tienen un fin como agar bacteriano.

♦Medios semisolidos: estos se preparan apartir de un medio liquido agregandole un agente solidificante en una pequeña porcion y se utiliza para la investigancion de la movilidad de las bacterias.

Seguridad en el Laboratorio (sopa de letras, respuestas)

Los microorganismos con inclusion de los geneticamente modificaddos, cultivos celulares y endoparpasitos humanos son supsceptibles de originar cualquier tipo de infecion, alergia o toxicidad. dentro del grupo de los virus, se incluyen agentes no clasificados asociados a encerolopatias espongiformes trasmitibles (prione o proteinas)

Un microorganismo es una entidad microbiologica celular o no, capaz de reproducirse o de transferir material genetico. los agentes causantes de riesgo biologico son los virus, bacterias, hongos y parasitos.

 La probabilidad de RIESGO ante un determinado peligro se reproduzca un daño.

 Para elimicar la precensia de un agente infeccioso que esta afuera del organismos por medio de la exposicion directa de agentes fisicos o quimicos es la DESINFECCION.

 Los dispositivos o aparatos que garantizan la seguridad, como las prendas de proteccion personal son los guantes, el calzado adecuado, cubrebocas, bata blanca y estos son llamados equipo de seguridad.

 La CONTENCION se emplea para describir los metodos que hacen seguro el manejo de materiales infecciosos en el laboratorio.

 Un HIPOCLORITO SODICO es utilizado para la desinfeccion de superficies, desinfeccion de ropa hospitalaria y desechos, descontaminar salpicaduras de sangre, desinfeccion de equipos y mesas de trabajo resistentes a la oxidacion, debido a que son potentes agentes oxidantes que liberan Cl2.

 La separacion entre familias incopatibles, o correcto ALMACENAMIENTO se separan acidos de bases, oxidantes de inflamables, venenos activos, sustancias cancerigenas, peroxidables etc. Tiene como objetivo la correcta separacion entre las familias de productos incompatibles.

El principal agente biologico del grupo 2 para los hongos es el PERGILLUSFUMIGATOS el cual aparece frecuentemente en el maiz y cacahuates asi como alfombras frecuentemente mojadas.